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重生之液相色譜反相柱
發布時間:2020-10     作者:   分享到:

新的色譜柱總是很貴,科研院所和規模較小的公司財大氣粗的少有,給每一種方法配一根新的色譜柱只是一個美好的愿望。我相信大部分同學或者同行的實驗室里總會有那么一批用過的色譜柱。當我們需要開發新的方法時老板總會從抽屜或者其他角落里翻出一根陳年老柱,神秘兮兮的告訴你這根色譜柱的悠久歷史,希望你能用這根柱子再創輝煌。這個時候相信很多同學心里已是萬“馬”奔騰。


不過,seriously,色譜柱值不值得再生,究竟該如何再生,卻一直是一個江湖傳說。筆者今日也遇上這種問題,也深入的做了一些調查。發現事情不是那么簡單??偟膩碚f,我們首先要考慮的是值不值得在一根老柱子上浪費時間,當然,對于那些老板抱著死馬當活馬醫的心思的同學,這個是不適用的,反正,作為一個行業小白,我們的時間在老板眼里就是用來浪費的。


一般來說,對于C18柱子其壽命大概在2000次左右,不過根據實際情況,可能會上下浮動不少。如果舊柱子的使用次數跟預期壽命相差不大,就沒必要浪費時間在上面了,一方面是投入產出比太低,另一方面對于一個全新的方法開發來說,舊柱子會有各種各樣的問題,比如基線不穩,各種鬼峰,分辨率太低等。還不如說服老板買一根新的柱子。


對于科研人員來說,有時候我們進幾百次樣就可以完成一個項目,如果這根柱子就此被拋棄,還是覺得挺可惜的。大部分老板會暫時把它打入冷宮,等待在對的時間遇見對的你。對于這種柱子,花點時間在上面還是很有價值的。還有一些柱子是由于使用不當造成性能下降,我很也會考慮用一些方法讓它重生。


柱子長時間不用或者操作不當會導致一些問題,比如,固定相徹底變干燥,柱子入口篩板被顆粒物堵塞,固定相表面鍵合官能團流失,難溶解物質在柱子里的堆積等。針對不同的問題,我們有不同的解決方法。比如保護液蒸發,固定相徹底變干,這并不是很可怕的事情。用有機相慢慢沖洗就可以恢復。


柱子進口篩板堵塞的問題可以通過反沖解決。在日常使用中也要注意預防這個問題,通過保護柱和樣品過濾可以將絕大多數顆粒物移除。


固定相表面鍵合的官能團會隨著使用時間的增長而緩慢流失,這也是為什么柱子使用一段時間之后柱效會下降。這是正常的,無須擔心。需要我們注意的是一些極端條件會加速這個過程,比如流動相的pH超出柱子的耐受范圍。如果出現非正常的流失現象,柱子基本上無法修復。


對于沉積在柱子中的難溶解物質,還是可以通過一定的程序洗脫的。柱子的再生,也往往是指這個過程。對于大多數的問題,可以依次用乙腈或者甲醇,二氯甲烷,然后回到乙腈或者甲醇,最后用流動相反向沖洗柱子。沖洗的溶劑種類,時間長短和順序可以根據實際情況調整,以下是一個實際例子:

100% 甲醇

100% 乙腈

75%乙腈+25%異丙醇

100%異丙醇

100%二氯甲烷

100%正己烷

100%異丙醇


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